一、标本容器的相關操作
标本容器可以是玻璃的,但最好使用塑料制品。标本容器應當堅固,正确地用蓋子或塞子蓋好後應無洩漏。在容器外部不能有殘留物。容器上應當正确地粘貼标簽以便于識别。标本的要求或說明書不能夠卷在容器外面,而是要分開放置,最好放置在防水的袋子裡。
标本在設施内的傳遞為了避免意外洩漏或溢出,應當使用盒子等二級容器,并将其固定在架子上使裝有标本的容器保持直立。二級容器可以是金屬或塑料制品,應該可以耐高壓滅菌或耐受化學消毒劑的作用。密封口最好有一個墊圈,要定期清除污染。
标本接收需要接收大量标本的實驗室應當安排專門的房間或空間。
打開包裝接收和打開标本的人員應當了解标本對身體健康的潛在危害,并接受過如何采用标準防護的培訓,尤其是處理破碎或洩漏的容器時更應如此。标本的内層容器要在生物安全櫃内打開,并準備好消毒劑。
二、移液管和移液輔助器的使用
1、應使用移液輔助器,嚴禁用口吸取。
2、所有移液管應帶有棉塞以減少移液器具的污染。
3、不能向含有感染性物質的溶液中吹入氣體。
4、感染性物質不能使用移液管反複吹吸混合。
5、不能将液體從移液管内用力吹出。
6、刻度對應(Mark-to-mark)移液管不需要排出最後一滴液體,因此最好使用這種移液管。
7、污染的移液管應該完全浸泡在盛有适當消毒液的防碎容器中。移液管應當在消毒劑中浸泡适當時間後再進行處理。
8、盛放廢棄移液管的容器不能放在外面,應當放在生物安全櫃内。
9、有固定皮下注射針頭的注射器不能夠用于移液。
10、在打開隔膜封口的瓶子時,應使用可以使用移液管的工具,而避免使用皮下注射針頭和注射器。
11、為了避免感染性物質從移液管中滴出而擴散,在工作台面應當放置一塊浸有消毒液的布或吸有消毒液的紙,使用後将其按感染性廢棄物處理。
12、受污染的移液管放在适宜的消毒劑中浸泡和高壓消毒鍋中消毒滅菌,再用自來水沖洗及去離子水沖淨。
三、避免感染性物質的擴散
1、為了避免被接種物灑落,微生物接種環的直徑應為2~3mm并完全封閉,柄的長度應小于6cm以減小抖動。
2、使用封閉式微型電加熱器消毒接種環,能夠避免在本生燈的明火上加熱所引起的感染性物質爆濺。最好使用不需要再進行消毒的一次性接種環。
3、幹燥痰液标本時要注意避免生成氣溶膠。
4、準備高壓滅菌和/或将被處理的廢棄标本和培養物應當放置在防漏的容器内(如實驗室廢棄物袋)。在丢棄到廢棄物盛器中以前,頂部要固定好(如采用高壓滅菌膠帶)。
5、在每一階段工作結束後,必須采用适當的消毒劑清除工作區的污染。
四、生物安全櫃的使用
1、應參考國家标準和相關文獻,對所有可能的使用者都介紹生物安全櫃的使用方法和局限性。應當發給工作人員書面的規章、安全手冊或操作手冊。特别需要明确的是,當出現溢出﹑破損或不良操作時,安全櫃就不再能保護操作者。
2、生物安全櫃運行正常時才能使用。
3、生物安全櫃在使用中不能打開玻璃觀察擋闆。
4、安全櫃内應盡量少放置器材或标本,不能影響後部壓力排風系統的氣流循環。
5、安全櫃内不能使用本生燈,否則燃燒産生的熱量會幹擾氣流并可能損壞過濾器。允許使用微型電加熱器,但最好使用一次性無菌接種環。
6、所有工作必須在工作台面的中後部進行,并能夠通過玻璃觀察擋闆看到。
7、盡量減少操作者身後的人員活動。
8、操作者不應反複移出和伸進手臂以免幹擾氣流。
9、不要使實驗記錄本﹑移液管以及其他物品阻擋空氣格栅,因為這将幹擾氣體流動,引起物品的潛在污染和操作者的暴露。
10、工作完成後以及每天下班前,應使用适當的消毒劑對生物安全櫃的表面進行擦拭。
11、在安全櫃内的工作開始前和結束後,安全櫃的風機應至少運行5min。
12、在生物安全櫃内操作時,不能進行文字工作。
13、通過在生物安全櫃内人工産生微生物(枯草杆菌芽孢),在生物安全櫃外用培 養皿采集枯草杆菌芽孢判定生物安全櫃對工作人員的防護能力。
五、避免感染性物質的食入以及與皮膚和眼睛的接觸
1、微生物操作中釋放的較大粒子和液滴(直徑大于5μm)會迅速沉降到工作台面和操作者的手上。實驗室人員在操作時應戴一次性手套,并避免觸摸口、眼及面部。
2、不能在實驗室内飲食和儲存食品。
3、在實驗室裡時,嘴裡不應有東西-鋼筆、鉛筆、口香糖。
4、不應在實驗室化妝。
5、在所有可能産生潛在感染性物質噴濺的操作過程中,操作人員應将面部、口和眼遮住或采取其他防護措施。
六、避免感染性物質的注入
1、通過認真練習和仔細操作,可以避免破損玻璃器皿的刺傷所引起的接種感染。應盡可能用塑料制品代替玻璃制品。
2、銳器損傷(如通過皮下注射針頭、巴斯德玻璃吸管以及破碎的玻璃)可能引起意外注入感染性物質。
3、以下兩點可以減少針刺損傷:(a)減少使用注射器和針頭(可用一些簡單的工具來打開瓶塞,然後使用吸管取樣而不用注射器和針頭);(b)在必須使用注射器和針頭時,采用銳器安全裝置。
4、不要重新給用過的注射器針頭戴護套。一次性物品應丢棄在防∕耐穿透的帶蓋容器中。
5、應當用巴斯德塑料吸管代替玻璃吸管。
七、離心機的使用
1、在使用實驗室離心機時,儀器良好的機械性能是保障微生物安全的前提條件。
2、應按照操作手冊來操作離心機。
3、離心機放置的高度應當使小個子工作人員也能夠看到離心機内部,以正确放置十字軸和離心桶。
4、離心管和盛放離心标本的容器應當由厚壁玻璃制成,或最好為塑料制品,并且在使用前應檢查是否破損。
5、用于離心的試管和标本容器應當始終牢固蓋緊(最好使用螺旋蓋)。
6、離心桶的裝載、平衡、密封和打開必須在生物安全櫃内進行。
7、離心桶和十字軸應按重量配對,并在裝載離心管後正确平衡。
8、操作指南中應給出液面距離心管管口需要留出的空間大小。
9、空離心桶應當用蒸餾水或乙醇(異丙醇,70%)來平衡。鹽溶液或次氯酸鹽溶液對金屬具有腐蝕作用,因此不能使用。
10、對于危險度3級和4級的微生物,必須使用可封口的離心桶(安全杯)。
11、當使用固定角離心轉子時,必須小心不能将離心管裝得過滿,否則會導緻漏液。
12、應當每天檢查離心機内轉子部位的腔壁是否被污染或弄髒。如污染明顯,應重新評估離心操作規範。
13、應當每天檢查離心轉子和離心桶是否有腐蝕或細微裂痕。
14、每次使用後,要清除離心桶、轉子和離心機腔的污染。
15、使用後應當将離心桶倒置存放使平衡液流幹。
16、當使用離心機時,可能噴射出可在空氣中傳播的感染性顆粒。如果将離心機放置在傳統的前開式的Ⅰ級或Ⅱ級生物安全櫃内,這些粒子由于運動過快而不能被安全櫃内的氣流截留。而在Ⅲ級生物安全櫃内封閉離心時,可以防止生成的氣溶膠廣泛擴散。但是,良好的離心操作技術和牢固加蓋的離心管可以提供足夠的保護,以防止感染性氣溶膠和可擴散粒子的産生。
八、勻漿器、搖床、攪拌器和超聲處理器的使用
1、實驗室不能使用家用(廚房)勻漿器,因為它們可能洩漏或釋放氣溶膠。使用實驗室專用攪拌器和消化器更為安全。
2、蓋子、杯子或瓶子應當保持正常狀态,沒有裂縫或變形。蓋子應能封蓋嚴密,襯墊也應處于正常狀态。
3、在使用勻漿器、搖床和超聲處理器時,容器内會産生壓力,含有感染性物質的氣溶膠就可能從蓋子和容器間隙逸出。由于玻璃可能破碎而釋放感染性物質并傷害操作者,建議使用塑料容器,尤其是聚四氟乙烯(polytetrafluoroethylene,PTFE)容器。
4、使用勻漿器、搖床和超聲處理器時,應該用一個結實透明的塑料箱覆蓋設備,并在用完後消毒。可能的話,這些儀器可在生物安全櫃内覆蓋塑料罩進行操作。
5、操作結束後,應在生物安全櫃内打開容器。
6、應對使用超聲處理器的人員提供聽力保護。
九、組織研磨器的使用
1、拿玻璃研磨器時應戴上手套并用吸收性材料包住。塑料(聚四氟乙烯)研磨器更加安全。
2、操作和打開組織研磨器時應當在生物安全櫃内進行。
十、冰箱與冰櫃和培養箱的維護和使用
1、冰箱、低溫冰箱和幹冰櫃應當定期除霜和清潔,應清理出所有在儲存過程中破碎的安瓿和試管等物品。清理時應戴厚橡膠手套并進行面部防護,清理後要對内表面進行消毒。
2、儲存在冰箱内的所有容器應當清楚地标明内裝物品的科學名稱、儲存日期和儲存者的姓名。未标明的或廢舊物品應當高壓滅菌并丢棄。
3、應當保存一份凍存物品的清單。
4、除非有防爆措施,否則冰箱内不能放置易燃溶液。冰箱門上應注明這一點。
5、恒溫培養箱的使用最高溫度為60℃。
十一、标本的收集、标記和運輸
1、始終遵循标準防護方法,所有操作均要戴手套。
2、應當由受過培訓的人員來采集病人或動物的血樣。
3、在靜脈抽血時,應當使用一次性的安全真空采血管取代傳統的針頭和注射器,因為這樣可以使血液直接采集到帶塞的運輸管和/或培養管中。用完後自動廢棄針頭。
4、裝有标本的試管應置于适當容器中運至實驗室,在實驗室内部轉運也應這樣。檢驗申請單應當分開放置在防水袋或信封内。
5、接收人員不應打開這些袋子。
十二、打開标本管和取樣
1、應當在生物安全櫃内打開标本管。
2、必須戴手套,并建議對眼睛和黏膜進行保護(護目鏡或面罩)。
3、在防護衣外面要再穿上塑料圍裙。
4、打開标本管時,應用紙或紗布抓住塞子以防止噴濺。
十三、玻璃器皿和“銳器”
1、盡可能用塑料制品代替玻璃制品。隻能用實驗室級别(硼矽酸鹽)的玻璃,任何破碎或有裂痕的玻璃制品均應丢棄。
2、不能将皮下注射針作為移液管使用。
十四、用于顯微鏡觀察的蓋玻片和塗片
用于顯微鏡觀察的血液、唾液和糞便标本在固定和染色時,不必殺死塗片上的所有微生物和病毒。應當用鑷子拿取這些東西,妥善儲存,并經清除污染和/或高壓滅菌後再丢棄。
十五、自動化儀器(超聲處理器、渦旋混合器)
1、為了避免液滴和氣溶膠的擴散,這些儀器應采用封閉型的。
2、排出物應當收集在封閉的容器内進一步高壓滅菌和/或廢棄。
3、在每一步完成後應根據操作指南對儀器進行消毒。